Определение групповой специфичности крови

Если кровь на вещественных доказательствах происходит от человека, то следующим этапом является определение ее групповой принадлежности по системе АВ0, а также, при необходимости, по другим генетически обусловленным системам: MNSs, Р, Льюис, и др. с использованием реакции абсорбции-элюции, гемагглютинации, реакции торможения гемагглютинации.

Для определения групповой принадлежности жидкой крови используется реакция гемагглютинации, основанная на способности эритроцитов к склеиванию при взаимодействии с соответствующими сыворотками.

Для определения группы крови в пятнах применяется реакция абсорбции.

До недавнего времени для АВО-типирования использовались только поликлональные антисыворотки человеческого происхождения, которые характеризовались невысокой чувствительностью и неабсолютной специфичностью.

В настоящее время с помощью гибридомной технологии путем слияния иммунизированных соответствующим антигеном лимфоцитов и миеломных клеток были получены своеобразные клетки-гибриды, способные синтезировать в неограниченном количестве определенные моноклональные антитела. Таким образом были получены моноклональные реагенты анти-А, анти-В и анти-Н.

Реакция гемагглютинации для определения групповой принадлежности жидкой крови производится в пробирке, куда вносится смесь отмытых эритроцитов и реагент анти-А и анти-В. Результат оценивается после центрифугирования по наличию или отсутствию агглютинации эритроцитов.

Реакция гемагглютинации оказывается непригодной для определения группы крови в пятнах по той причине, что жидкая сыворотка в пятне не содержится, а эритроциты довольно быстро разрушаются и очень прочно фиксированы на материале предмета-носителя, поэтому выделить их для проведения РГА в целом виде невозможно. В таких случаях применяется реакция абсорбции-элюции.

Сущность реакции состоит в том, что при взаимодействии одноименных агглютининов и агглютиногенов происходит реакция абсорбции агглютининов, т.е. агглютинины связываются с агглютиногенами. Если при абсорбировании сыворотки ее агглютинин встретился с одноименным агглютиногеном (α с А, или В с β), то способность такой сыворотки склеивать (агглютинировать) соответствующие ей эритроциты после абсорбции снижается или совсем исчезает. Если же сыворотка в процессе реакции абсорбции соприкасается с агглютиногеном, не соответствующим ее агглютинину, то такая сыворотка после абсорбции не утрачивает способности агглютинировать соответствующие ей эритроциты.

Для проведения реакции абсорбции используют моноклональные антитела в титре 1: 32, которые приводят в соприкосновение с фрагментами исследуемого материала (например, нитями ткани одежды). Длительность абсорбции – 18 часов. Затем реагент отсасывают и вновь устанавливают его титр. Значительное снижение титра только анти-А свидетельствует о наличии в исследуемом пятне агглютиногенов А, что соответствует II группе крови. Снижение титра анти-В доказывает присутствие агглютиногенов В и принадлежность исследуемой крови к III группе. Снижение же титров и анти-А и анти-В позволяет сделать вывод о наличии крови IV группы. Если титр антител остается неизменным, то это позволяет предположить наличие крови группы 0.

После отсасывания реагентной сыворотки производят полное удаление избытка неабсорбированных антител путем многократного (3-4 раза) отмывания нитей материала в охлажденном изотоническом растворе.

В дальнейшем, термическим или химическим путем разрушают образовавшиеся в процессе абсорбции комплексы антиген-антитело и производят элюирование (выведение) абсорбированных антител в изотонический раствор хлорида натрия. Элюцию в физраствор обычно осуществляют на предметных стеклах. Для этого нити исследуемого материала на стеклах заливают двумя каплями физраствора и помещают в термостат на 30 минут. После этого к препаратам добавляют по капле 0, 5% взвеси стандартных эритроцитов группы А или В и микроскопически определяют наличие или отсутствие агглютинации.