Уравнение ионного обмена.

R- SO3H + Na⁺ = RSO3Na + H⁺

R-(NH3)3OH + Cl^- = RSO3Cl + OH^-

Ионообменное равновесие

константа А\В – фактор разделения

обменная емкость – кол-во ионов, обмениваемых 1 гр сухого ионита.

Бывает полной обменной емкостью (ПОЕ) статической (равновесной) обменной емкостью (СОЕ) динамической обменной емкостью до проскока (ДОЕ) полной динамической обменной емкостью (ПДОЕ) обменной емкостью по отдельным ионогенным группам (для полифункциональных ионитов).

Существует несколько режимов элюирования

1. Изократический режим

мало анализируемого вещества, состав элюента постоянен.

2. Градиентное элюирование

создание градиента рН или ионной сиоы во время разделения

плавно повышается концентрация соли. При достижении нужной концентрации вымываются нужные ионы.

3. Ступенчатое элюирование

когда сходу не получается определить нужную концентрацию соли. Делает отмывание по фракциям.

16. Аффинная хроматография. Принцип разделения. Область применения.

Основана на способности биомолекул специфически и обратимо связываться с некоторыми веществами.

Фермент – субстрат

Антиген – антитело

Гормон – рецептор

Фермент – кофермент

НК – НК

Структура носителя

Матрица: агарозный (сефароза с бромцианом) и ПАА гели, полистиролные смолы, целлюлоза

Лиганд: биомолекула (белки, пептиды, а-к-ты, витамины, нуклеотиды, НК, углеводы)

Спейсер: мостик между матрицей и лигандом, алифатическая цепочка.

Применяется для выделения каких-либо биомолекул в чистом виде, для повышения их концентрации

17. Эксклюзионная хроматография. Принцип разделения. Область применения.

Разделение основано на распределении молекул по размерам между растворителем (в порах сорбента) и раствором (протекающим через гранулы)

Большие отмываются первыми, мелкие отмываются последними, тк успеваютзабиться в поры ==== выход в порядке уменьшения массы

Для молекул более 5 тыс Да

Плюсы метода:

- не зависит от температуры, рН, ионной силы и состава буфера. Стабильная система.

- адсорбция минимальна – стабильный объем вещества

- объем элюирования в прямой зависимости от массы, что позволяет определить все компоненты

Основные понятия

Коэффициент распределения – отношение анализируемого вещества, находящегося в порах неподв. фазы, к к количеству этого же в-ва в подвижной фазе

К = 0...1

0 – не проникает, 1 – совсем застрял

Объем элюирования (Ve)- объем подвижной фазы, собранный на выходе колонки до момента, соответствующего максимальной концентрации компонента в смеси (максимум пика на хроматограмме)

Холостой (внешний) объем (Vo) – объем растворителя, находящийся в пространстве между гранулами геля, то есть объем, необходимый для элюирования больших молекул, не проникших в поры.

Внутренний объем (Vs) – объем р-теля в порах геля.

Vs = aW

a – вес сухого носителя, для приготовления геля

W – объем воды, поглощаемой единицей массы геля

Kp = Ve – Vo\Vs