Идентификация подлинности аналогов эстрогенов нестероидной структуры

Для испытания подлинности ФС рекомендует ряд цветных реакций. Характерные окрашенные продукты образуются при взаимодействии с концентрированной серной кислотой. Так, при действии концентрированной серной кислотой на хлороформный раствор гексэстрола (в присутствии формалина) слой хлороформа окрашивается в вишнево-красный цвет. Раствор в концентрированной серной кислоте диэтилстильбэстрола имеет ярко-оранжевое окрашивание, постепенно исчезающее после разбавления водой.

Нагревание диэтилстильбэстрола с уксусной кислотой и ванилином с последующим добавлением хлороводородной кислоты, кипячением и прибавлением хлорамина (после охлаждения) приводит к возникновению синего окрашивания.

Гексэстрол можно обнаружить по образованию бромпроизводных. При действии бромной водой на его раствор в ледяной уксусной кислоте выделяется осадок тетрабромгексэстрола желтого цвета:

Диэтилстильбэстрол при выполнении той же реакции в присутствии жидкого фенола приобретает появляющееся при нагревании изумрудно-зеленое окрашивание.

Наличие незамещенных фенольных гидроксилов в молекулах можно обнаружить с помощью хлорида железа (III). Эту реакцию используют для идентификации диэтилстильбэстрола, спиртовые растворы которого окрашиваются в зеленый цвет, постепенно переходящий в желтый.

Идентифицировать гексэстрол можно используя реакцию нитрования, После добавления азотной кислоты и нагревания на водяной бане постепенно появляется желтое окрашивание:

Раствор диэтилстильбэстрола в ледяной уксусной кислоте после добавления фосфорной кислоты и нагревания на водяной бане приобретает интенсивное желтое окрашивание, которое почти исчезает при разбавлении ледяной уксусной кислотой.

ИК-спектр диэтилстильбэстрола, снятый после прессования в таблетках с бромидом калия, должен полностью совпадать с рисунком спектра, прилагаемым к ФС.

Для идентификации и количественного определения синтетических аналогов эстрогенов используют УФ-спектрофотометрию. Растворы в этаноле в области 230-350 нм у 0, 005%-ного гексэстрола имеют максимум поглощения при 280 нм, минимум - при 247 нм и плечо от 283 до 287 нм, а 0, 001%-ного диэтилстильбэстрола - максимум поглощения при 242 нм и плечо от 276 до 280 нм. Растворы в 0, 1 М гидроксиде натрия в области 220-350 нм у 0, 0005%-ного гексэстрола имеют максимумы поглощения при 242 и 295 нм, минимум - при 270 нм, а 0, 0006%-ного диэтилстильбэстрола - один максимум поглощения при 262 нм.

Подтвердить подлинность и количественно определить синтетические эстрогены можно реакцией этерификации. При действии на гексэстрол и диэтилстильбэстрол уксусным ангидридом или бензоилхлоридом образуются диацетаты (дибензоаты), имеющие характерную температуру плавления.

Количественное определение гексэстрола и диэтилстильбэстрола основано на получении сложных эфиров (диацетильных производных) при нагревании с точно отмеренным количеством уксусного ангидрида (в присутствии пиридина). Избыток уксусного ангидрида, превратившийся в уксусную кислоту, оттитровывают 0, 5 М раствором гидроксида натрия (индикатор фенолфталеин). Параллельно выполняют контрольный опыт с тем же количеством уксусного ангидрида.

Химизм этого процесса при определении гексэстрола:

Аналогичный процесс происходит при определении диэтилстильбэстрола. Количественно определить гексэстрол можно также обратным бромид-броматометрическим методом. По приведенной выше реакции бром, выделившийся за счет взаимодействия 0, 1 М раствора бромата калия и бромида калия, осаждает гексэстрол в виде тетрабромпроизводного. Избыток титранта определяют йодометрическим методом.

Гексэстрол и диэтилстильбэстрол можно идентифицировать и фотометрировать по реакции азосочетания с диазотированной сульфаниловой кислотой. Образуется азокраситель за счет наличия в молекулах фенольных гидроксилов:

Аналогичная цветная реакция лежит в основе унифицированного способа качественного и фотоколоримегрического определения гексэстрола и диэтилстильбэстрола в таблетках (В.Г. Беликов).