Экстракорпоральное оплодотворение ооцитов in vitro

Оплодотворение яйцеклеток у млекопитающих осуществляется в яйцеводах. Это затрудняет доступ исследователя к изучению условий среды, в которой происходит процесс оплодотворения. Поэтому система оплодотворения in vitro явилась ценным аналитическим инструментом для изучения биохимических и физиологических факторов, включающихся в процесс успешного соединения гамет. Более того, предполагалось, что эта система найдёт применение в технологии разведения животных.

Крупный рогатый скот. Применяют следующие варианты оплодотворения in vitro и культивирования ранних ооцитов у коров. В первом варианте:

1. Оплодотворение проводят в капле модифицированной среды Тироде.

2. После созревания in vitro ооциты очищают от окружающих кумулюсных клеток и переносят шприцем в микрокапли по пять ооцитов в каждой.

3. Суспензия сперматозоидов объёмом 5 мкл вводится в капли с ооцитами, чтобы достичь концентрации сперматозоидов в каплях 1 млн./мл.

4. Через 48 ч после оплодотворения in vitro определяют наличие дробления ооцитов.

5. Затем эмбрионы, помещают в монослой эпителиальных клеток, для дальнейшего развития в течение 5 дней, т. е. до пересадки постоянному реципиенту на 7 день цикла.

Во втором варианте проводят оплодотворение дозревших in vitro фолликулярных ооцитов в яйцепроводе эстральной крольчихи. Через 20 ч после оплодотворения зиготы помещали на 3 дня в яйцепроводы ложнобеременных крольчих (бывших ранее, т. е. 48 ч назад, в состоянии охоты). Здесь они развивались до стадии морулы и дальнейшей пересадки реципиентам.

В обоих случаях оценённые на жизнеспособность эмбрионы пересаживают в рога матки тёлок с синхронизированной охотой на 7 день полового цикла.

Характерно, что во втором варианте опыта количество эмбрионов, находящихся на стадии морулы, было в 2, 3 раза больше. Эти данные, а также результаты морфологической оценки полученных эмбрионов показали, что в яйцеводе крольчих создаются более благоприятные условия для оплодотворения, чем в разработанных в настоящее время культуральных питательных средах.

В результате трансплантации эмбрионов было зарегистрировано 8 стельностей, в том числе одна двойневая, и родилось по 3 живых телёнка из фолликулярных ооцитов, оплодотворённых в яйцепроводе крольчихи и экстракорпорально. Остальные 2 стельности закончились рождением мёртвого телёнка и абортом.

Результаты экстракорпорального оплодотворения созревших in vitro ооцитов, выделенных из яичников животных разного возраста, представлены в табл. 5.2.

Видно, что возраст животных не оказывает существенного влияния на получение эмбрионов. Это свидетельствует о возможности получать эмбрионы как от телят 1-4-месячного возраста, так и от полновозрастных оценённых по собственному фенотипу коров.

Таблица 5.2. Получение эмбрионов от экстракорпорального оплодотворения ооцитов, взятых из яичников животных разного возраста.