Тема: «Переливання крові і стадії переливання крові. Антигенна система крові. Визначення груп крові та резус-фактору. Донорство».

ПРАКТИЧНЕ ЗНАЧЕННЯ ІЗОСЕРОЛОГІЧНИХ ВЛАСТИВОСТЕЙ КРОВІ

З часу відкриття груп крові отримало широке використання правило Отенберга: " Еритроцити донора не повинні містити аглютиногени, однойменні природним аглютинінам реципієнта". Що це означає? Це означає те, що кров донорів Оα β (I) групи можна переливати реципієнтам всіх груп, оскільки еритроцити донора не містять аглютиногенів А і В. Потому донори Оα β (I) групи були названі " універсальними донорами". Проте знекровленим хворим переливання великих доз крові " універсального донора" може привести до гемолізу еритроцитів реципієнта надлишком донорських антитіл, що клінічно виявлятиметься картиною гемолітичного шоку. Тому в даний час дотримуються строгих правил:

1. Переливати можна тільки одногрупну кров.

2. Переливати можна тільки кров, сумісну по резус-фактору.

3. Обов'язковим є проведення проб на сумісність.

ВИЗНАЧЕННЯ ГРУП КРОВІ

ЗАГАЛЬНІ ПОЛОЖЕННЯ

Визначення груп крові за системою АВО проводиться двома способами: простою реакцією і подвійною реакцією. Проста реакція проводиться стандартними сироватками, при цьому виявляють аглютиногени А і В в досліджуваних еритроцитах. Подвійна реакція припускає визначення групи крові по стандартних еритроцитах і стандартних сироватках. Подвійною реакцією визначають кров переважно у донорів.

Термін придатності стандартних сироваток, що аглютинують, складає 4 місяці при t від +4 до +6 °С. Щоб уникнути помилок при визначенні груп крові стандартні гемаглютинуючи сироватки офарблюють в різні кольори. Сироватка Оα β (I) групи не забарвлюється, і етикетка її не маркірується. Сироватка Аβ (II) групи забарвлюється в синювато-зелений колір, і етикетка маркірується синім кольором. Сироватка Вα (III) забарвлюється в рожевий колір, і етикетка маркірується червоним кольором. Сироватка АВо (IV) групи забарвлюється в жовтий колір, етикетка - теж в жовтий колір. На етикетці флаконів з сироваткою указують групову приналежність, титр сироватки, номер серії, термін придатності. Титр сироватки - це її максимальне розведення, в якому сироватка дає ще чітку аглютинацію. Оптимальний титр повинен бути не нижче 32, тобто при розведенні сироватки в 32 рази вона зберігає чітку аглютинацію.

Для визначення групи крові кров можна забирати з вени, з пальця, вколовши в м'якоть нігтьової фаланги.

Оснащення: стандартні сироватки Оα β (I), Aβ (II), Вα (III) двох різних серій кожної групи; білі тарілки; скляні палички; піпетки; спирт; ватяні кульки; 0, 9% розчин хлориду натрію; розчин йоду; скарифікатор.

Перед визначенням групи крові необхідно переконатися в придатності сироваток:

1) флакон не повинен мати тріщин, дефектів;

2) на флаконі обов'язково повинна бути етикетка;

3) обов'язково уважно прочитати термін придатності, титр сироватки, серію і групову

приналежність;

4) у сироватці не повинно бути пластівців, осаду, плівок.
Сироватками краще користуватися в день розтину ампул але допускається зберігання відкритих ампул 3-4 доби в холодильнику, за умови, якщо шийка заклеюється пластиліном, лейкопластиром, закривається ваткою.

МЕТОДИКА ВИЗНАЧЕННЯ ГРУПИ КРОВІ ПРОСТОЮ РЕАКЦІЄЮ

Визначення групи крові проводиться при температурі + 15 - +25 °С на маркірованій площині (тарілці) білого кольору, де записується прізвище особи, у якої визначається кров. На тарілку наносять по 2 краплі стандартних сироваток груп Оα β (I), Аβ (II), Вα (III) двох серій. Відстань між краплинами не менше 4-5 см. Кожна сироватка наноситься своїй пипеткой. Праворуч від крапель сироваток поміщають краплю крові, яка повинна бути в 5-10 разів менше крапель сироваток. Перемішують кров з сироватками. Можна перемішувати кров з сироваткою одним і тим же кутом наочного скла (або скляною паличкою), але в цьому випадку після кожного перемішування необхідно промивати стекло у воді і досуха витирати. За ходом реакції в цілому спостерігають не менше 5 хв, періодично похитуючи тарілку. У краплі, в яких до третьої хвилини спостереження відбулася аглютинація, вносять по 1 краплі фізіологічного розчину і спостерігають ще дві хвилини. Додавання фізіологічного розчину не руйнує дійсної аглютинації і дозволяє віддиференціювати її від псевдоаглютинації, обумовленої мимовільним склеюванням еритроцитів в монетні стовпчики. Результат оцінюється по наявності аглютинації.

Оцінка результатів:

Проводиться не раніше чим через 5 хв.

1. Якщо із стандартними сироватками аглютинації не наступило, це означає, що

еритроцити досліджуваної крові не мають аглютиногенів і вона відноситься до Оα β (I) групи.

2. Якщо аглютинація наступила з сироваткою Оα β (I) і Вα (III) груп і не наступила з

сироваткою Аβ (II), то досліджувана кров - Аβ (II) групи.

3. Якщо аглютинація наступила з сироватками Оα β (I) і Аβ (II) і не наступила з сироваткою Вα (III), означає досліджувана кров - Вα (III) групи.

4. Наявність аглютинації зі всіма стандартними сироватками не дозволяє віднести її до АВо (IV) групі, оскільки можлива панаглютинація. В цьому випадку на тарілку наносять 2 краплі стандартної сироватки АВо (IV) групи і додають до них краплю досліджуваної крові. Результат оцінюють через 5 хв. Якщо аглютинації не відбулося, то досліджувана кров - АВо (IV) групи.

МЕТОД ВИЗНАЧЕННЯ ГРУПИ КРОВІ ПОДВІЙНОЮ (ПЕРЕХРЕСНОЮ) РЕАКЦІЄЮ

Для визначення групи крові цим методом окрім стандартных сироваток беруть стандартні еритроцити груп Оα β (I), Аβ (II), Вα (III), які готують в установах служби крові. Кров для дослідження беруть з вени в кількості 5 мл в чисту суху пробірку без додавання цитрату, для того, щоб можна було отримати окремо сироватку і еритроцити. Тарілку ділять горизонтальною лінією на дві частини. У верхній частині ведуть дослідження стандартними сироватками з досліджуваними еритроцитами, в нижній - стандартними еритроцитами з досліджуваною сироваткою. Через 5 хв проводять оцінку і роблять висновок про групу крові.

ВИЗНАЧЕННЯ ГРУПИ КРОВІ МОНОКЛОНАЛЬНИМИ АНТИТІЛАМИ

Моноклональні антитіла отримують за допомогою генної інженерії. АВО-титруючи моноклональні антитіла (цоліклони Анти-А і Анти-В) випускаються в різних країнах: Германії, Англії, Канаді, США, Росії - в промислових масштабах. Вони не є продуктами клітин людини, їх готують з крові стерильних мишей, тому виключений вміст в них вірусу гепатиту і СНІДу. Зважаючи на високу активність і авідність реагентів цоліклон, а також повну їх стандартність, для кожного визначення групи крові достатньо застосовувати по одній серії реагентів Анти-А і Анти-В. Цоліклон Анти-А забарвлений в блакитний колір, Анти-В - в рожевий.

Цоліклони Анти-А і Анти-В наносять на планшет або пластинку по одній великій краплі (0, 1 мл) під відповідними написами " Анти-А" і " Анти-В". Поряд з краплями антитіл наносять досліджувану кров по одній маленькій краплі у співвідношенні 10: 1 (0, 01 мл). Після змішування реагентів і крові за реакцією аглютинації спостерігають протягом 2, 5 хв.

Оцінка результатів:

1. Аглютинації немає ні з цоліклоном Анти-А, ні з цоліклоном Анти-В. Отже, досліджувані еритроцити не містять антигенів А і В, і кров належить до групи Оα β (I).

2. Аглютинація спостерігається тільки з цоліклоном Анти-А. Отже, досліджувані

еритроцити містять тільки антиген А, і кров належить до групи Аβ (II).

3. Аглютинація спостерігається тільки з цоліклоном Анти-В. Отже, досліджувані

еритроцити містять тільки антиген В, і кров належить до групи Вα (III).

4. Аглютинація спостерігається як з цоліклоном Анти-А, так і з цоліклоном Анти-В. Отже, досліджувані еритроцити містять обидва антигени (А і В), і кров належить до групи АВо (IV).

5. З метою виключення аутоаглютинації, яка може спостерігатися у деяких хворих

(мієломна хвороба, опікова хвороба), а також в пуповинній крові новонароджених, у разі встановлення групи крові АВ (IV) необхідно провести контрольне дослідження: одну краплю (0, 1 мл) ізотонічного розчину хлориду натрію змішати з маленькою краплею (0, 01 мл) досліджуваної крові. Реакція аглютинації повинна бути ВІДСУТНЬОЮ.

ПОМИЛКИ ПРИ ВИЗНАЧЕННІ ГРУП КРОВІ

Помилки технічного характеру:

1) не маркіровані тарілки;

2) використана одна паличка при змішуванні сироваток різних груп і крові;

3)порушено співвідношення між стандартними сироватками і досліджуваною кров'ю

(еритроцитів повинно бути в 5-10 разів менше, ніж сироватки);

4) оцінка результатів проводиться до закінчення 5 хв.;

5) не дотриманий температурний режим;

6) якщо не додається 0, 9% розчин хлориду натрію, за аглютинацію приймають монетні

стовпчики.

Помилки біологічного характеру, тобто неспецифічна аглютинація:

1) здатність еритроцитів давати аглютинацію зі всіма стандартними сироватками;

2) еритроцити аглютинують з власною сироваткою - для виключення помилки необхідно

тарілку поставити в термостат при t +37 °С на 5-6 хв. Може бути у людей із

захворюваннями крові, печінки, нирок, хронічними запальними процесами;

3) повна панаглютинація - випробовувані еритроцити і сироватка володіють

панаглютинуючими властивостями, додають фізіологічний розчин, ставять тарілки в

термостат, відмивання еритроцитів тричі фізіологічним розчином неефективно.

В цьому випадку необхідно досліджувати аглютиногени А і В в слині хворого;

4) феномен Томпсона - інфікована кров дає неспецифічну аглютинацію;

5) у новонароджених аглютиногени А і В ще не достатньо активні і тому дослідження

повинне проводиться сироватками з високим титром антитіл;

6) наявність слабких аглютиногенів А₂, А₃.

Помилки, пов'язані з сироватками:

1) використання сироваток з титром нижче 1: 32;

2) у сироваток закінчився термін придатності;

3) використання інфікованих сироваток.