Иммунофенотипирование

- метод качественного и количественного определения наличия

исследуемых антигенов в клетках

Задачи:

1. изучение наличия на поверхности или внутри клеток рецепторных белков - антигенов

2. определение количества клеток, имеющих (экспрессирующих)

этот рецептор в исследуемой популяции

3. определение количества рецепторов на поверхности клеток

4. определение сочетания нескольких рецепторов на поверхности одной клетки (коэкспрессия)

Окраска:

Моноклональные антитела, меченные люминесцентной меткой

Моноклональные антитела позволяют выявлять дифференцировочные антигены на гемопоэтических клетках крови у человека и имеют маркировку CD (cluster of differentiation) - кластер дифференцировки:

Практическое использование:

1. исследование клеточного иммунитета

2. оценка гемопоэза

Исследование клеточного звена иммунитета у человека:

CD3 - Т-лимфоциты - норма в крови взрослого - 67-76%

CD3, CD4 - Т-хелперы - 38-46%

CD3, CD8 - Т-супрессоры - 31-40%

Соотношение хелперы/супрессоры - 1-1, 5

(при СПИДе – соотношение снижается меньше 1)

CD19 - В-лимфоциты - норма - 11-16 %

CD16 - макрофаги

CD38 - плазмоциты

2. оценка гемопоэза:

- 1-4 классы зрелости – морфологически нераспознаваемые

- распознавание – иммунологическое – иммунофенотипирование

- суть метода

- часть рецепторных белков сохраняются в клетке всегда, они характеризуют тип кроветворения – лимфоидное, миелоидное и линию – Т- и В- лимфоциты

– при созревании клеток одни рецепторные белки на поверхности появляются, а другие исчезают

Иммуногистохимия

- метод качественного определения антигенов в клетках и тканях на гистологических срезах

Задачи метода:

1. определение гистогенетического типа исследуемой ткани

2. определение иммунофенотипа клеток

3. оценка процессов пролиферации (Ki-67, PCNA) и апоптоза (СD 95) в ткани

4. определение наличия рецепторов к гормонам

5. определение ростовых факторов (IL 1-16)

6. выявление онкопротеинов (р21, р53, N-MYC и т.д.)

7. определение типов коллагена (I, II, IY типа)

8. микробиология/вирусология (гепатиты В и С, цитомегаловирус, герпес и т.д.)

Окраска:

Моноклональные антитела

Определение гистогенетического типа клеток тканей:

- основано на выявлении белков промежуточных филаментов, специфичных для клеток определенных тканей

1. эпителиальные ткани - выявляется кератин (Кeratin)

2. соединительные ткани - виментин (Vimentin)

3. нервная ткань - S100 protein

4. мышечные ткани - десмин (Desmin)

5. лимфоидная и миелоидная ткани - общий лейкоцитарный антиген (LCA)