Студопедия

Главная страница Случайная страница

КАТЕГОРИИ:

АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника






Ход определения. Химический контроль ценности питательных сред

Химический контроль ценности питательных сред

Применение белковых гидролизатов в качестве полноценных источников органогенов для бактерий обусловлено наличием растворимых и т. о. доступных для усвоения бактериальными клетками продуктов расщепления молекул белка: пептонов, пептидов (высоко-, средне-, низкомолекулярных), аминокислот.

Наиболее информативными и удобными для определения являются 2 показателя питательной ценности азотсодержащих (белковых) основ:

1. содержание аминного азота (NH2) в мг % (в %) – показатель позволяет судить о глубине расщепления белковых молекул и с высокой степенью точности дает представление о питательной ценности для бактерий, т. к. последние усваивают азот только из концевой аминогруппы (т. н. «аминный азот»)

2. содержание свободного триптофана в мг % - показатель определяет абсолютное количество одной из АМК, что дает возможность судить о глубине расщепления белка.

Содержание общего и аминного азота в питательных основах

  Вид основы Количество (мг%) Степень расщепления (%)
Общего азота Аминного азота
Гидролизат Хоттингера (Хартли) 1100-1200 650-700 55-60
Триптический гидролизат казеина 800-1100 500-600 55-65
Кислотный гидролизат казеина (казаминовые кислоты) 800-900 750-800 80-90
Пептон Мартена 450-550 130-150 20-25
Дрожжевой аутолизат 250-300 75-150 45-55

 

Определение аминного азота

Метод: «Формольное титрование по упрощенному методу Зеренсена-Гаврилова»

Принцип метода:

Белки и продукты их расщепления являются амфотерными электролитами (т. е. имеют в составе молекулы разнозаряженные группы, взаимонейтрализующиеся, в результате чего молекула в целом реагирует нейтрально)

 

NH2 ─ CH ─ COOH

R

Это схематическое изображение белка или продукта его расщепления (пептона, полипептида, альбумозы, АМК)

 

NH3+ ─ CH ─ COO

R

Так перемещается ион водорода в нейтральной среде (рh=7,0), в результате образуются заряженные группы

NH2 → NH3+ ; COOH → COO

Аминогруппа, щелочная, карбоксильная группа, кислая,

заряжена положительно заряжена отрицательно

 

Амфотерные электролиты нет возможности определять количественно с помощью титрования, т. к. они одновременно имеют свойства и кислоты, и щелочи, содержат положительно и отрицательно заряженные участки. Титрационный метод станет доступным, если превратить амфотерный электролит в кислоту или щелочь. В данной методике это достигается с помощью формальдегида. При взаимодействии с формальдегидом аминогруппа белка (аминокислоты, полипептида и т. д.) связывается с карбонильной группой формальдегида. Образуются т. н. «метиленовые производные формальдегида», имеющие кислый характер (щелочная аминогруппа нейтрализована). Т. о. обеспечивается возможность оттитровать щелочью кислыекарбоксильныегруппы, количество которых равно количеству аминогрупп, связанных с формальдегидом. Количество щелочи, ушедшей на титрование, эквивалентно количеству аминного азота (азота аминогрупп).



Принцип метода кратко:«Блокирование формальдегидом при рh 7,0 концевых аминогрупп и титрование щелочью равного количества оставшихся свободными карбоксильныхгрупп»

 

Проведение исследования колориметрическим способом

(с применением индикаторов)

 

Реактивы

Раствор индикатора бромтимолового синего: 100 мг сухого порошка растирают в ступке с 3,2 мл 0,05Н раствора NaOH, переносят в мерную колбу емкостью 250,0 мл и добавляют дистиллированную воду до метки.

Хранить укупоренным в темном стекле. Срок годности не ограничен.

Формольная смесь: к 50,0 мл коммерческого формалина прибавляют 1,0 мл 1 % водно-спиртового раствора фенол-фталеина (1 г фенол-фталеина + 1,0-5,0 мл спирта + дист. вода до 100,0 мл). Слабо розовый цвет свидетельствует о ph 7,0. При необходимости подщелачивают 0,1Н или 10 % NaOH, добавляя щелочь до достижения слабо розового окрашивания.

Хранить укупоренным. Срок годности не ограничен.

 

Ход определения.

<== предыдущая лекция | следующая лекция ==>
Основна література | Предмет, методология и система судебной бухгалтерии. Соотношение судебной бухгалтерии и бухгалтерского учета

mylektsii.ru - Мои Лекции - 2015-2017 год. (0.009 сек.)Пожаловаться на материал