Наработка антител в асцитных жидкостях

Наименее хлопотный способ наработать большое количество антител- это ввести гибридомные клетки в перитонеальную полость мыши (или крысы). Через 6-30 дней (чаще через 10-14) в зависимости от числа введенных клеток и скорости их деления в перитонеальной полости образуется асцитная жидкость, содержащая большое количество гибридомных клеток и монАТ (концентрация антител в асцитах может достигать 20мг/мл). Для лучшей приживаемости гибридомных клеток и во избежание развития солидных (твердых) опухолей мышам предварительно (за 7-20 дней до введения клеток) вводят минеральное масло- пристан. Если все-таки вместо асцитной жидкости образовалась солидная опухоль, ее извлекают, гомогенизируют, и в фосфатно- солевом буфере вводят другим мышам.

В процессе развития асцитной опухоли клетки гибридомы оздоравливаются, избавляются от бактериальной и вирусной инфекций. Скорость роста извлеченных из асцита клеток, как правило, значительно выше, чем до введения их в перитонеальную полость мышей.

Количество клеток, вводимых мышам, может быть любым: от нескольких десятков или сотен клеток до нескольких сотен миллионов. Однако следует учитывать, что при очень маленьком количестве вводимых клеток увеличивается время образования асцита, при очень большом- есть риск гибели мыши, если клетки заражены микоплазмой. В целом успех выращивания асцитной жидкости зависит, в основном, от качества мышей (их линейности - генетического соответствия требуемой линии).

Наработке антител в асцитных жидкостях во многих странах препятствует законодательство, считая эту процедуру негуманной по отношению к животным. В нашей стране пока такого запрета нет, но соответствующий законопроект уже обсуждается. Наработка антител с использованием генноинженерных методов применяется только для наиболее ценных гибридом и будет подробно обсуждаться в следующей главе.

Контрольные вопросы

1. Определение моноклональных антител

2. Общие свойства моноклональных антител

3. Применение моноклональных антител

4. В чём заключается смысл клинической диагностики растворимых антигенов

5. Основные недостатки клинической диагностики растворимых антигенов

6. Особенности диагностики вирусов, бактерий, паразитов

7. Применение моноклональных антител в терапии

8. Механизмы действие абзимов

9. Основные проблемы, возникающие при использовании монАТ в терапии

10. Этапы получения моноклональных антител методом гибридомной технологии

11. В чем заключается смысл иммунизации

12. Основные объекты иммунизации

13. Схемы иммунизации мышей

14. Обработка антигенов перед иммунизацией

15. Гибридизация В-лимфоцита с миеломой

16. Культивирование гибридом in vitro и in vitro

17. Методы селекции слившихся клеток

18. Селекция основанная на использовании селективных сред

19. Использование проточного цитофлуориметра (достоинства и недостатки метода)

20. Методы клонирования гибридом

21. Наработка гибридомных клеток и секретируемых ими антител

22. «Отцами» гибридомной технологии являются