Иммунологические методы диагностики заболеваний.

Кафедра клинической лабораторной диагностики

Учебно-методическое пособие для студентов

Автор: доцент кафедры, Ильинская Т.Н.

Гомель, 2004 год

Введение.

Лабораторная диагностика инфекционных заболеваний включает следующие направления: идентификацию выделенного возбудителя по его антигенной структуре, обнаружение антител к нему в сыворотках больных. С этой целью разработан целый ряд иммунологических реакций, применяемых в практической лабораторной диагностике.

Цель:

Получение знаний и практических навыков по вопросам диагностики оппортунистических инфекций с использованием иммунологических методов, основанных на взаимодействиях антигенов и антител.

Задачи:

· Знать общие закономерности постановки иммунологических методов (ИМ).

· Знать ИМ, основанные на прямом взаимодействии антигена с антителом (феномены агглютинации, преципитации, гемагглютинации, иммобилизации и др.);

· Знать ИМ, основанные на опосредованном взаимодействии антигена с антителом (реакции непрямой гемагглютинации, коагглютинации, латекс-агглютинации, угольной аггломерации, бентонит-агглютинации, связывания комплемента и др.);

· Знать ИМ с использованием меченых антител или антигенов (метод флюоресцирующих антител, иммуноферментный и радиоиммунный анализы, спин-иммунологический и другие методы).

Практические навыки:

· Реагенты и постановка РА по Груберу, пробирочной РА.

· Реагенты и постановка РНГА, латекс-агглютинации, коагглютинации.

· Реагенты и постановка реакции кольцепреципитации по Оухтерлони, радиальной иммунодиффузии по Манчини.

· Реагенты и постановка РСК.

· Реагенты и постановка прямой и непрямой РИФ по Кунсу.

· Реагенты, оборудование и постановка ИФА.

· Постановка аллергических проб.

Основные учебные вопросы:

1. Принципы и механизмы иммунологических реакций, используемых для обнаружения бактериальных, вирусных, грибковых антигенов и для определения антител к ним в клиническом материале.

2. Реакция агглютинации. Реакция агглютинации на стекле. Реакции агрегат- агглютинации. Реакция коаагглютинации. Латекс-агглютинация. Реакция пассивной геммагглютинации.

3. Реакция преципитации. Реакция иммунопреципитации.

4. Встречный иммуноэлектрофорез.

5. Иммуноферментный анализ.

6. Иммуномагнитное обнаружение антигенов. Реакции нейтрализации антигенов. Реакция иммобиллизации.

7. Метод иммунофлюоресцирующих антител. Методика исследования препаратов при прямом методе. Методика исследования препаратов при непрямом методе. Приготовление и обработка контрольных препаратов.

8. Реакция обратной пассивной гемагглютинации.

9. Количественное определение иммуноглобулинов. Значение для диагностики инфекционных заболеваний.

10. Варианты постановки кожных аллергических проб для диагностики инфекционных заболеваний.

Основная литература:

1. А.Н. Маянский Микробиология для врачей (очерки патогенетической микробиологии). Нижний Новгород: Изд-во НГМА, 1999. с.394.

2. Медицинская микробиология. Часть первая./ Под ред. А.М. Королюка и В.Б. Сбойчакова. –СПб., 1999. с. 272.

3. Медицинская микробиология./ Под ред. В.И. Покровского. –М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1999.с.1183.

4. Конспект лекций.

Дополнительная литература:

1.: Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: Учебник для мед. вузов./ Под ред. А.И. Коротяева, С.А. Бабичева –СПб.: СпецЛит, 2000. с. 580.

Вспомогательные материалы по теме.

Иммунологические исследования.

Имунологические методы используют, как для выявления титра антител в сыворотке крови (серодиагностика), так и для обнаружения антигенов в биологических жидкостях.

Общие закономерности иммунологических методов (ИМ):

1) исследование производится in vitro;

2) проявляются при иммунологическом соответствии (гомологичности) антигена и антитела;

3) протекают в 2 фазы (невидимая и видимая). Для количественной характеристики иммунологических методов исследования используют такие понятия, как чувствительность и специфичность.

Чувствительность = число положительных реакций у истинных больных / число обследованных больных с подтвержденным диагнозом

Специфичность = число отрицательных реакции в контрольной группе / число обследованных в контрольной группе.

В идеале чувствительность и специфичность иммунологических методов приближается к 100%.

Все иммуномикробиологические методы можно разделить на 3 группы:

1) ИМ, основанные на прямом взаимодействии антигена с антителом (феномены агглютинации, преципитации, гемагглютинации, иммобилизации и др.);

2) ИМ, основанные на опосредованном взаимодействии антигена с антителом (реакции непрямой гемагглютинации, коагглютинации, латекс-агглютинации, угольной аггломерации, бентонит-агглютинации, связывания комплемента и др.);

3) ИМ с использованием меченых антител или антигенов (метод флюоресцирующих антител, иммуноферментный и радиоиммунный анализы и другие методы).

Реакция агглютинации (РА)

Реакция основана на взаимодействии поверхностных антигенов бактерий и других корпускулярных частиц с антителами и протекает в две фазы:

1) специфическая фаза - связывание детерминантной группы (эпитопа) антигена с паратопом - активным центром иммуноглобулина (невидимая фаза);

2) неспецифическая (видимая) фаза - образующийся комплекс (АГ+АТ) утрачивает растворимость и выпадает в осадок в виде хлопьев. Однако это явление возможно лишь в электролитной среде, например в 0, 85% растворе натрия хлорида.

РА можно применять для обнаружения специфических антител в сыворотке крови и, наоборот, при помощи стандартной агглютинирующей сыворотки можно идентифицировать выделенные микробы.